СОВРЕМЕННЫЕ СПОСОБЫ ДИАГНОСТИКИ АМИЛОИДОЗА

Аннотация. В современном понимании проблемы амилоидоза требует существенной коррекции сложившаяся практика ведения больных разными формами системного амилоидоза в отечественном здравоохранении. Имеющиеся стандарты недостаточно учитывают эффективность диагностики разных типов амилоидоза, их соотношение, современные тренды в выживаемости больных. В практике ведения амилоидоза используются недостаточно чувствительные методы диагностики воспаления, не позволяющие выявлять субклиническую активность и патогенетические варианты воспаления, от которых во многом зависит выбор методов лечения.

За последние десятилетия существенно изменились многие представления, касающиеся проблемы амилоидоза. Установление гетерогенности белкового состава амилоидных фибрилл позволило приблизиться к пониманию механизмов развития отдельных форм амилоидоза, создать современную классификацию амилоидоза и обосновать дифференцированные подходы к лечению (Sipe JD, Benson MD и соавт., 2016).

Ключевой новационной чертой нынешнего периода является появление новых методов лечения, основанных на современных знаниях молекулярных основ патогенеза амилоидоза, которые изменили качество жизни больных амилоидозом, пролонгировали показатель общей выживаемости [5].

Ключевые слова: амилоидоз, современные методы диагностики.

Цель работы

Рассмотреть современный методы диагностики амилоидоза.

Методика исследования

Проведен анализ данных из трудов ученых-медиков.

Введение

Амилоидоз – нарушение белкового обмена, характеризующееся образованием аномального фибриллярного белка. Он накапливается в плазме крови, а затем оседает в тканях: стенках сосудов и строме органов, образуя белково-полисахаридный комплекс – амилоид. В зависимости от белка-предшественника различают следующие виды амилоидоза: AL, AA, AF, ASC1, Aβ, AH, AE и др. По этиологии амилоидоз бывает первичный (идиопатический), вторичный (ассоциированный с инфекционными, гнойно-воспалительными заболеваниями, опухолями), наследственный (финский тип, датский кардиопатический тип, средиземноморская лихорадка) и старческий. По распространённости амилоидоз подразделяют на локальный (местный) и генерализованный (общий) [1].

Результаты и их обсуждение

Предполагаемый на основании клинических и лабораторных данных амилоидоз необходимо подтвердить морфологически обнаружением амилоида в биоптатах тканей.

При подозрении на AL-тип амилоидоза рекомендуют производить пункцию костного мозга. Подсчет плазматических клеток и окраска пунктата на амилоид позволяют не только диагностировать амилоидоз, но и дифференцировать первичный и ассоциированный с миеломой варианты AL-амилоидоза. Положительный результат исследования костного мозга на амилоид отмечают у 60% больных AL-амилоидозом [2].

Наиболее часто для диагностики разных типов амилоидоза проводят биопсию слизистой оболочки прямой кишки, почки, печени. Биопсия слизистого и подслизистого слоев прямой кишки позволяет выявить амилоид у 70% больных, а биопсия почки – практически в 100% случаев.

Биопсийный материал для выявления амилоида необходимо окрашивать конго красным с последующей микроскопией в поляризованном свете для выявления способности к двойному лучепреломлению.

Современная морфологическая диагностика амилоидоза включает не только обнаружение, но и типирование амилоида, поскольку тип амилоида определяет терапевтическую тактику.

От структуры фибрилл амилоида зависят реакции с красителями и иногда они могут отсутствовать (ахроамилоид) или быть слабыми.

Для типирования часто применяют пробу с перманганатом калия.

При обработке окрашенных конго красным препаратов 5%-ным раствором перманганата калия АА-тип амилоида теряет окраску и утрачивает свойство двойного лучепреломления, тогда как AL-тип амилоида сохраняет их. Использование щелочного гуанидина позволяет более точно дифференцировать АА- и AL-амилоидоз [3-4].

Более специфичной для амилоида является реакция люминесценции с тиофлавином Т, а также тиофлавином S. Но последний не всегда удобен, так как имеет высокую фоновую флюоресценцию, из-за чего тиофлавин Т можно считать наиболее оптимальным красителем для выявления амилоида. Особенность взаимодействия с амилоидом заключается в том, что тиофлавин может встраиваться в структуру фибрилл вдоль и поперёк оси филамента. Это отличает тиофлавин от конго красного, который встраивается только в торцы амилоидных структур.

При встраивании тиофлавина в структуру амилоида происходит значительное возрастание квантового выхода (в 1000 раз и более). Тиофлавин Т является перспективным красителем не только для выявления амилоида, но и для изучения его структуры. Взаимодействие тиофлавина Т с амилоидом специфично: краситель не взаимодействует с глобулярными белками в нативном состоянии (кроме ацетилхолинэстеразы и сывороточных альбуминов), с белками в развернутом и промежуточных состояниях, с аморфными агрегатами белков [1].

Наиболее эффективным методом типирования амилоида служит иммуногистохимическое исследование с применением антисывороток к основным типам амилоидного белка (специфические антитела против АА-белка, легких цепей иммуноглобулинов, транстиретина и бета-2-микроглобулина) [3-4].

Заключение

Использование тиофлавина Т является весьма перспективным методом для диагностики и изучения амилоидоза.

Тиофлавин Т не должен заменить конго красный, но может его дополнить в случае затруднений в постановке диагноза.

Также потенциально развивающимся является метод иммуногистохимии для типирования амилоида.